Utilidad del método rápido para detectar carbapenemasas Carba NP

 

Carba NP es un método fenotipíco desarrollado para la detección rápida de carbapenemasas en bacilos gramnegativos. Se basa en la hidrólisis in vitro de imipenem por un lisado de la bacteria a estudiar, y cuya detección ocurre por cambios de pH y color, usando como indicador rojo fenol.

El Dr. Robin Patel, Presidente de la División de Microbiología Clínica de la Clínica Mayo, y miembro del Grupo de Trabajo de antibioticos del CLSI, destacó que, “El nuevo documento M100 describe el examen de Carba NP para demostrar la producción de carbapenemasas en Enterobacterias y otros organismos. Esta prueba es más rápida y más específica que la prueba de Hodge modificada”.

 

Metodología

La prueba Carba NP (carbapenemasas Nordmann-Poirel) se realiza de la siguiente manera. Un ansa calibrada (10 μl) de la cepa ensayada directamente recuperada del antibiograma se resuspende en 200 μl de buffer de lisis Tris-HCl, se agita en vortex durante 1 minuto y se incuba a temperatura ambiente durante 30 minutos. Esta suspensión bacteriana se centrifuga a 10.000 × g a temperatura ambiente durante 5 minutos. Treinta μl del sobrenadante, que corresponde al lisado bacteriano, se mezcla con 100 μl de una solución hecha de 3 mg de monohidrato de imipenem, rojo fenol y 0,1 mmol/L de ZnSO4. La solución de rojo de fenol se prepara mezclando 2 ml de una solución de rojo de fenol (Merck Millipore) 0,5% (peso/vol) con 16,6 ml de agua destilada. El pH se ajusta a 7,8 mediante la adición de gotas de NaOH 1N. La mezcla de la solución de rojo de fenol y la suspensión enzimática ensayada se incuba a 37 ° C durante un máximo de 2 horas.

 

Resultados

Para cada cepa a estudiar se hace un pocillo con imipenem y uno sin antibiótico a modo de control. Un resultado positivo se observa por un cambio de color del rojo al amarillo debido a una caída del ph por rotura del antibiótico. Un resultado negativo no hay cambios respecto del control sin antibiótico.

carbanpcolor

 

 

Interpretación de la prueba

carbaNP

 

En un estudio canadiense independiente publicado en 2013 en la revista de la ASM donde se estudiaron 244 cepas de bacilos gramnegativos incluyendo Enterobacterias y Pseudomonas aeruginosa, se confirmó la especificidad del 100% y el valor predictivo positivo de la prueba original, pero la sensibilidad y valor predictivo negativo fueron 72,5% y 69,2%, respectivamente, y aumentó a 80% y 77,3%, cuando se uso un lisado bacteriano más concentrado. Los resultados falsos negativos se asociaron con cepas mucoides, o con enzimas con baja actividad carbapenemasa, particularmente las de tipo OXA-48, que se ha convertido en una preocupación a nivel mundial en Enterobacterias.

Los autores ademas consideran que en general, el método Carba NP es fácil de realizar, de bajo costo, y, en la mayoría de los casos, fácil de interpretar, sobre todo con KPC y productores de NDM (el indicador de color se volvió amarillo antes de 30 min). Sin embargo, los resultados fueron menos que óptimos con algunos otros productores de carbapenemasas, en particular algunas enzimas tipo OXA-48. Pruebas a ciegas realizadas en sus diferentes laboratorios mostraron sólo algunas discrepancias (5 de 74 aislamientos probados) y siempre estaban relacionados con algunos productores de carbapenemasas  tipo GES-5 o OXA-48, que eran falsamente negativas en un laboratorio, pero positivas (naranja tenue) en otro laboratorio. Estos resultados cegados destacaron la reproducibilidad de la prueba, pero también los problemas inherentes al método, tales como la subjetividad en la interpretación de los resultados y las diferencias técnicas entre laboratorios.

Ya están disponibles en el mercado variantes de ésta prueba, adaptadas por las distintas empresas, como Biomerieux y Rosco, y muchos microbiólogos ya la están adoptando en la rutina de sus laboratorios, agilizando los tiempos de entrega de resultados, y facilitando la vigilancia epidemiológica y el manejo de los pacientes internados.

 

Fuentes de información:
1. Nordmann P, Poirel L, Dortet L. 2012. Rapid detection of carbapenemase-producing Enterobacteriaceae. Emerg. Infect. Dis. 18:1503–1507.
2. Dortet L, Poirel L, Nordmann P. 2012. Rapid detection of carbapenemase-producing Pseudomonas spp. J. Clin. Microbiol. 50:3773–377.
3. Nathalie Tijet et. al. 2013. Evaluation of the Carba NP Test for Rapid Detection of Carbapenemase-Producing Enterobacteriaceae and Pseudomonas aeruginosa. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 57:4578 – 4580.
 
M. Cifarelli

M. Cifarelli

Es Bioquimico de la Universidad Nacional del Sur (Bahia Blanca). Matricula Nacional: 10278.
Realizo la Residencia en Bioquímica Clínica en el Hospital de Clínicas – UBA. Contacto: mdcifarelli@gmail.com

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