Utilidad de la prueba rápida de Betalactamasa

Como sabemos, las betalactamasas son enzimas bacterianas que degradan el anillo betalactámico, como mecanismo de resistencia. Las pruebas rápidas para betalactamasa determinan si los agentes betalactámicos de espectro limitado (ej. penicilina y ampicilina) pueden ser utilizados para tratar unas pocas especies claves de bacterias. Entre las bacterias a las que debe realizarse este test encontramos:  Haemophilus spp., Moraxella catarrhalis, Neisseria gonorrhoeae, y Enterococcus spp.

Para Haemophilus spp., N. gonorrhoeae y Moraxella catarrhalis una prueba rápida de betalactamasa da información clínica relevante, acerca de la sensibilidad, más prontamente que la CIM;  por ejemplo en el caso de infección respiratoria  por Haemophilus spp., ó  Moraxella catarrhalis el tratamiento de elección sería Amoxicilina oral o Ampicilina endovenosa, mientras que con el dato de betalactamasa positiva sería Amoxicilina-clavulánico o Ampicilina- sulbactam.

Además es el único método confiable para detectar la producción de este tipo de enzimas en Enterococcus spp.  por sobre el método de medir la diferencia de halos entre Ampicilina y Ampicilina- sulbactam.

También puede confirmar la sensibilidad a penicilina determinadas por CIM en Staphylococcus spp. , especialmente de las cepas “borderline” (CIM entre 0.06 y 0.25 µg/ml). Actualmente la mayoría de las colonias aisladas de Staphylococcus spp. produce betalactamasa (penicilinasa) y así, son a menudo tratadas como betalactamasa positiva.

 

Elección de la prueba de betalactamasas
Existen diferentes métodos de betalactamasas rápida: el método de nitrocefin,  el método acidimétrico, y el método iodométrico. Las pruebas que utilizan nitrocefin dan resultados confiables para Haemophilus spp., N.gonorrhoeae, Moraxella catarrhalis, estafilococos y enterococos, mientras que los otros dan resultados confiables solo para algunos de estos microorganismos.

 

Realización de la prueba
La prueba es realizada con un disco de nitrocefin (Cefinase(R), BD BBL, es la más usada),  el cual utiliza un sustrato betalactámico cromogénico (una cefalosporina) que cambia de color cuando la amida de su anillo betalactámico es hidrolizado por acción de una betalactamasa.

cefinasa

Para la prueba se realiza una suspensión turbia a partir de un cultivo fresco de 16-24 horas de crecimiento, se introduce el disco de nitrocefin, se incuba 1 hora y se observa si hay cambio de color. Alternativamente, se puede colocar una colonia directamente en el disco que contiene la cefalosporina cromogénica, y se incuba durante 1 hora a temperatura ambiente.

El viraje del disco al color rojo indica una prueba positiva.

 

betalactamasa_nitrocefina_4_

 

 

cefinase_negative_et_positive-b2a98

 

Para asegurar los resultados de todos estos método es indispensable probar, conjuntamente con la cepa clínica, un control positivo y un control negativo.

 

Una prueba positiva de betalactamasa predice:

• Resistencia a penicilina, ampicilina y amoxicilina para aislamientos de Haemophilus spp., N. gonorrhoeae y Moraxella catarrhalis.

• Resistencia a penicilinas, acil aminopenicilinas, carboxipenicilinas, y ureidopenicilinas para aislamientos de estafilococos y enterococos.

Un resultado negativo de la prueba de betalactamasa no descarta la resistencia a los betalactámicos por otros mecanismos, y deberá ser confirmado por otros métodos.

No se debe realizar esta prueba a las enterobacterias, Pseudomonas spp. y otros bacilos gram negativos aeróbicos, ya que el resultado no predice la sensibilidad a los ß-lactámicos de uso común en clínica.

 

 
Fuentes de información:
Manual de procedimientos para la determinación de la sensibilidad a los antimicrobianos en bacterias aisladas de humanos. INEI-ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán” 
Manual de Laboratorio para la Identificación y Prueba de Susceptibilidad a los Antimicrobianos de Patógenos Bacterianos de Importancia para la Salud Pública en el Mundo en Desarrollo. USAID- CDC- OMS.
 
 

M. Cifarelli

M. Cifarelli

Es Bioquimico de la Universidad Nacional del Sur (Bahia Blanca). Matricula Nacional: 10278. Realizo la Residencia en Bioquímica Clínica en el Hospital de Clínicas - UBA. Contacto: mdcifarelli@gmail.com

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